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【蓝莓】蓝莓组培技术( 二 )

种植知识 蓝莓



（2）细胞分裂素：天然：6-BA（6－苄基酰嘌呤）、KT（激动素，糠基酰嘌呤）；人工：ZT（玉米素）、2-iP（2-异戊烯酰嘌呤）；它们的主要作用是促进细胞的分裂和器官的分化、延缓组织的衰老、增强蛋白质的合成、抑制顶端优势、促进侧芽的生长及显著改变其他的激素作用；作用的强弱顺序为：TDZ,4PU>ZT>2-iP>6-BA>KT 。

（3）赤霉素：GA3 。

（4）乙烯及乙烯抑制剂 。

4.天然提取物（如椰乳、酵母提取物、番茄汁、香蕉泥等），其作用是提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等 。

5.琼脂（是从海藻中提取的一种高分子碳水化合物），其主要作用是使培养基在常温下凝固，同时不参与代谢 。

6.活性炭：加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，如可以防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡 。

（二）、1962年Marshing和Shong发明了MS培养基

（三）、培养基的制作程序：

六、外植体的选择和灭菌

（一）、外植体的选择:(1)外植体部位;(2)取材季节;(3)器官和生理状态和发育年龄;(4)外植体的大小 。

(二)、外植体的灭菌方法

1、常用灭菌药剂的使用和效果：

消毒剂使用浓度/%清除难易消毒时间/min灭菌效果

次氯酸钠2易5-30很好

次氯酸钙9-10易5-30很好

漂白粉饱和溶液易5-30很好

升汞0.1-1较难2-10最好

酒精70-75易0.2-2好

过氧化氢10-12最易5-15好

溴水1-2易2-10很好

硝酸银1较难5-30好

抗菌素4-50mg/L中30-60较好

2.灭菌方法:

(1)茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗---75%酒精浸泡10-20min---无菌水洗2-3次---Naclo或升汞溶液泡10-15min---无菌水洗3-4次

（2）果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min---70%酒精漂洗---2%Naclo液浸10min---无菌水2-3次---取出种子培养

（3）根及地下部器官的消互毒：自来水冲洗---纯酒精漂洗---升汞浸5-10min或2%Naclo液浸10-15min---无菌水洗3次

（4）花药的消毒：70%酒精浸泡数秒钟---无菌水洗2-3次---漂白粉上清液浸10min---无菌水洗2-3次 。

七、外植体接种和培养

1.外植体的接种

（1）接种室的消毒:用70%酒精喷雾使细菌和真菌孢子随灰尘的沉降而沉降,再用紫外灯照射20min；或用高锰酸钾与甲醛蒸气熏蒸 。 超净工作台可用新吉尔灭或酒精擦洗，其它一切器皿、衣物都要经严格的灭菌才能带进接种室 。

（2）接种：左手拿试管或三角瓶，右手拿接种针或镊子接种，瓶口要靠近酒精灯火焰、接种动作要快，以免造成污染 。

2.培养方法

（1）根据外植体不同可分为：胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养

（2）根据培养方式不同可分为：固体培养、液体培养、半固体培养、双层培养

3.培养条件：温度、湿度、光照、PH值、氧和其它气体

4.外植体褐变及其防止:(1)培养基中加入抗氧化剂；(2)用抗氧化剂浸泡外植体后再接种；(3)减少光照强度或在黑暗条件下培养；(4)多次更换培养基达到稀释释效应；(5)加入多胺类物质，如精胺、亚精胺通过刺激细胞分裂，加速组织生长，减少褐化 。

5.试管植物的玻璃化现象及其预防措施

外植体接种全过程

酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿

酒精擦拭旋转灼烧修剪外植体取外植体接种塞回瓶塞培养
【【蓝莓】蓝莓组培技术】

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